Personajes relevantes de Marvel Spider-Man

Peter Parker/ Spider-Man: Protagonista de esta historia al que le picó una araña radiactiva, lo que le otorgó sus habilidades arácnidas.

Mary Jane Watson: Gran amor de Peter Parker y una valiosa aliada dentro del título. Co-protagonista y personaje jugable.

Wilson Fisk / Kingpin: Uno de los grandes enemigos de Spidey. Magnate y jefe del crimen en la ciudad de Nueva York.

Yuri Watanabe: Agente de policía y contacto de Spider-Man con esta.

Otto Octavius/ Doctor Octopus: Jefe de Peter Parker y uno de los grandes villanos de los cómic. Cuenta con 4 brazos metálicos y una gran inteligencia.

May Parker: Tía de Peter, quien le crió tras la muerte de sus padres.

Martin Li / Mr. Negative: Director de FESTÍN y el villano principal del título. Su poder le permite manipular a las personas y crear energía negativa.

Norman Osborn: Alcalde de Nueva York. 

Harry Osborn: Mejor amigo de Peter y Mary Jane. En el juego no aparece debido a que se fue a Europa.

Herman Schultz / Shocker: Uno de los villanos del trepamuros. Cuenta con guantes que le permiten crear ondas de choque.

Jefferson Davis: Agente de policía y padre de Miles Morales.

Miles Morales: Co-protagonista y tercer personaje controlable. 

Rio Morales: Madre de Miles Morales.

Silver Sablinova/ Silver Sable: Líder de Sable, un grupo de mercenarios contratados por Osborn para mantener el orden.

Tombstone: Jefe de una banda de moteros con una piel invulnerable y fuerza sobrehumana.

Dr. Morgan Michaels: Creador de El Aliento del Diablo, una droga que todos los personajes buscan.

Scorpio: Enemigo de Spider-Man que cuenta con un aguijón venenoso. Está recluido en la Balsa.

Rhino: Enemigo de Spider-Man con fuerza sobrehumana y una armadura impenetrable. Está recluido en la Balsa.

Electro: Villano con superpoderes que le permiten usar la electricidad a su voluntad. Recluido en la Balsa.

Vulture: Villano con alas que le permiten volar. Recluido en la Balsa.